Внимание! Статья адресована врачам-специалистам

 

DOI: https://doi.org/ 10.24412/2076-4812-2026-6381-81-85

 

Нuseynova N.B., Agaeva N.A., BagirovaH.F.

Azerbaijan Medical University, Baku

The importance of different examination methods in the diagnosis of bacterial vaginosis in women with vitamin D deficiency

Резюме. Одним из важнейших защитных факторов сохранения репродуктивного здоровья женщины, нормального течения беременности, здоровья плода во внутриутробном и неонатальном периодах является наличие нормального микробиоценоза влагалища. В силу разных причин дисбаланс между представителями микробиоценоза влагалища всегда приводит к заболеваниям, актуальным для акушерства и гинекологии – бактериальному вагинозу (БВ). Учитывая осложнения, вызываемые как бактериальным вагинозом, а также потенциальную роль витамина D в их развитии, особую актуальность приобретает изучение взаимосвязи недостатка витамина D с состоянием микробиоценоза влагалища с использованием различных методов лабораторной диагностики.

Диагностика БВ требует комплексного подхода. Использование молекулярных методов, особенно в сочетании с определением уровня витамина D, повышает точность диагностики и позволяет установить патогенетические взаимосвязи.

Kлючевые слова: бактериальный вагиноз, Gardnerella vag., Atopobium vaginae, RTq PCR, витамин D.

 

Для цитирования: Гусейнова Н.Б., Агаева Н.А., Багирова Х.Ф. Значение различных методов исследования в диагностике бактериального вагиноза у женщин с дефицитом витамина D // Медицинские новости. – 2026. – №6. – С. 81–85.

 

Summary. One of the most important protective factors for maintaining a woman’s reproductive health, the normal course of pregnancy, and the health of the fetus in the intrauterine and neonatal periods is the presence of a normal vaginal microbiocenosis. For various reasons, an imbalance between the representatives of the vaginal microbiocenosis always leads to diseases that are relevant for obstetrics and gynecology – bacterial vaginosis (BV). Given the complications caused by both bacterial vaginosis and aerobic vaginitis, as well as the potential role of vitamin D deficiency in their development, studying the relationship between vitamin D deficiency and the state of the vaginal microbiocenosis using various laboratory diagnostic methods is of particular relevance.

Diagnosis of BV requires an integrated approach. The use of molecular methods, especially in combination with determination of vitamin D levels, increases the accuracy of diagnosis and allows the establishment of pathogenetic relationships.

Keywords: bacterial vaginosis, Gardnerella vag., Atopobium vaginae, RTq PCR, vitamin D.

 

For citation: Нuseynova N.B., Agaeva N.A., Bagirova H.F. The importance of different examination methods in the diagnosis of bacterial vaginosis in women with vitamin D deficiency // Meditsinskie novosti. – 2026. – N6. – P. 81–85.

 

___________________________________________________________________________________

 

Использованные сокращения: RT q PCR– Real Time quintative Polymerase Chain Reaction, полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, БВ – бактериальный вагиноз, ИФА – иммуноферментный анализ

___________________________________________________________________________________________________________________________

Одним из важнейших защитных факторов сохранения репродуктивного здоровья женщины, нормального течения беременности, здоровья плода во внутриутробном и нео-натальном периодах является наличие нормального микробиоценоза влагалища. Состав микрофлоры половых путей у здоровых женщин варьирует в зависимости от расовых, этнических, демографических и социальных обстоятельств. Стабильность микробиоты влагалища играет ключевую роль в профилактике венерических и неспецифических воспалительных заболеваний органов малого таза, а также в поддержании местного иммунитета [1–3].

Нарушение баланса, вызываемое представителями вагинального микробиоценоза, по различным причинам, обусловливает развитие бактериального вагиноза (БВ), что всегда актуально в акушерстве и гинекологии [1, 4, 5].

Неспособность обеспечить эффективную и оперативную диагностику и лечение данной патологии может привести к таким осложнениям, как эндометрит, дисплазия шейки матки, хориоамнионит, инфицированные аборты, внематочная беременность, рождение инфицированных или маловесных детей, преждевременный разрыв плодных оболочек, преждевременные роды и самопроизвольные аборты. Многочисленные факторы риска, неясные механизмы патогенеза, полиэтиологичность, склонность к длительному и рецидивирующему течению, а также опасность развития серьезных осложнений всегда подчеркивают актуальность БВ [4, 6–9].

В связи с этим чрезвычайно важно своевременно и точно выявлять нарушения микробиоценоза влагалища и возбудителей БВ, что имеет значение не только для диагностики, но и для профилактики осложнений и рецидивов [4, 6, 9, 10].

Проведение качественного и количественного анализа клинически значимых микроорганизмов у пациентов с БВ является нашей основной задачей, так как определение микробиомы в рутинных лабораториях является дорогостоящим и недоступным.

Недостаток витамина D в развитии различных соматических патологий, включая заболевания женской репродуктивной системы, представляет собой одну из наиболее актуальных проблем последних лет. Исследования показали, что рецепторы витамина D присутствуют в большинстве клеток организма и выполняют разнообразные функции, выходящие за пределы регуляции кальциево-фосфорного обмена. Установлена связь недостатка витамина D с нарушениями менструального цикла, синдромом поликистозных яичников, преэклампсией у беременных и БВ [11–14].

Витамин D также принимает активное участие в формировании как врожденного, так и приобретенного иммунитета: он способствует пролиферации клеток, снижает продукцию провоспалительных цитокинов, стимулирует экспрессию генов антимикробных пептидов, а также снижает уровень десквамации эпителия влагалища [11, 14–16]. Учитывая осложнения, вызываемые как БВ, а также потенциальную роль недостатка витамина D в их развитии, становится особенно важным исследование взаимосвязи между дефицитом этого витамина и состоянием микробиоценоза влагалища с применением различных методов лабораторной диагностики.

Цель исследования – на первом этапе провести диагностику БВ у всех обследованных пациентов с использованием в рутинных лабораториях микроскопических методов (критерии Амселя и Нюджента, Ассоциация специалистов по клинической микробиологии (KLIMUD) Руководство по исследованию образцов генитальной системы, Анкара, 2020) и культуральных методов (руководствуясь номенклатурой К. Бердже и стандартами EUCAST). На втором этапе подтвердить предполагаемые диагнозы с использованием качественной и количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (RT q PCR – Real Time quintative Polymerase Chain Reaction). На третьем этапе определить у всех обследованных пациентов концентрации витамина D (методом ИФА).

Материалы и методы

В Учебной Хирургической клинике Азербайджанского медицинского университета, в родильном доме №5 имени Ш. Алескерова и клиническом лабораторном центре «Реферанс» обследовано 80 женщин репродуктивного возраста (пациенты были информированы о проведении исследования), проведен забор сыворотки крови, выделений из влагалища. Исследование полученных патологических материалов проводилось на кафедре Медицинской микробиологии и иммунологии, биохимии Учебной Хирургической клиники Азербайджанского медицинского университета и в клиническом лабораторном центре «Реферанс».

На 1-м этапе диагностики генитальной и экстрагенитальной патологии использовали общепринятые клинико-анамнестические подходы, лабораторные исследования (микроскопия и культуральный метод, качественная и количественная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени).

На 2-м этапе определяли влияние недостатка витамина D на патогенетические особенности БВ.

На 3-м этапе, в зависимости от уровня витамина D в организме, все обследуемые пациенты были подразделены на три группы: Ι группу составили 26 практически здоровых женщин с нормальным содержанием витамина D (контрольная группа), группа ΙΙ – 26 женщин, страдающих БВ, с нормальным содержанием витамина D, группа ΙΙΙ – 28 женщин, страдающих БВ, с недостаточностью витамина D.

Критерии исключения из исследования: заболевания, передающиеся половым путем: Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, генитальный герпес.        

Пациенток осматривали с использованием гинекологического зеркала для оценки состояния слизистой оболочки стенок влагалища, а также забирали материал для исследования из цервикального канала и полости матки с помощью стерильного тампона. Для измерения pH влагалища применяли pH-метр (HANNA, Германия), а для Аминового теста – 1–2 капли 10% раствора гидроксида калия. Мазки окрашивали по методу Грама и исследовали под микроскопом. Патологический материал оценивали по критериям Амселя и Нюджента.

Посев проводили с использованием стандартных методов выделения чистых культур микроорганизмов из цервикального секрета. Для этого применяли следующие среды: кровяной агар с добавлением 5% донорской крови, яично-солевой агар, колумбийский агар с добавлением 5% дефибринированной бараньей крови (Oxoid), энтерококковый агар (Serva), среда Эндо (Oxoid), агар Gardnerella vaginalis (Oxoid), агар MRS (Oxoid), плотная питательная среда А7 (BioMérieux) и агар Сабуро. Микроаэрофильные микроорганизмы (Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis) инкубировали в эксикаторе в течение 48 часов в атмосфере с повышенным содержанием CO₂ и пониженным содержанием кислорода. Анаэробные микроорганизмы инкубировали в течение 5 суток в анаэробных условиях с использованием газогенерирующих пакетов Anaerocult-A (Merck KGaA, Германия) (руководствуясь номенклатурой Бердже и стандартами EUCAST).

Хотя микроскопические и культуральные методы широко применяются в клинической практике для диагностики воспалительных заболеваний влагалища, в ряде случаев бывает затруднительно точно идентифицировать патогенные микроорганизмы, играющие ключевую роль в их этиологии [5, 9, 17, 18].

Поэтому при подозрении на БВ в ходе исследования применялся метод количественной RT q PCR. С этой целью впервые в Азербайджане в Клиническом лабораторном центре «Реферанс» была разработана тестовая панель «Allplex™ Bacterial Vaginosis». Эта панель позволяет выявлять основные бактерии, участвующие в патогенезе БВ, такие как Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Megasphaera type-1, Mobiluncus spp., Bacteroides fragilis, BVAB-2.

Для изучения влияния витамина D на патогенез БВ определяли его концентрацию в сыворотке крови методом твердофазного ИФА (Bioactiva Diagnostic, Германия). Согласно международным рекомендациям, уровень витамина D выше 30 нг/мл (75 нмоль/л) считается физиологически нормальным, 21–30 нг/мл (51–75 нмоль/л) расценивается как недостаточность, значения ниже 20 нг/мл (50 нмоль/л) – как дефицит, а менее 10 нг/мл (25 нмоль/л) – как тяжелый дефицит витамина D [11, 13, 15]. При этом под понятием «больные с недостаточностью витамина D» учитывались случаи как недостаточности, так и выраженного и тяжелого дефицита.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием программы Excel. Для анализа результатов применялись как параметрические, так и непараметрические методы. Различия между группами оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты

Из 80 обследованных женщин 26 были практически здоровыми, у 54 был диагностирован БВ. При осмотре с помощью гинекологического зеркала и микроскопическом исследовании слизистой оболочки влагалища у практически здоровых женщин патологических изменений не выявлено. Аминный тест был отрицательным («–»), показатель pH влагалища находился в пределах 3,8–4,5. Mорфотипы Gardnerella spp. были выявлены единично в 4 образцах. В одном исследуемом материале обнаружены единичные клетки грибов.

По критериям Нюджента материалы обследования 19 практически здоровых женщин оценены на 0–3 балла (норма), у 7 женщин – на 4–6 баллов (промежуточное состояние), 7–10 баллов – БВ. Микроскопические изображения мазков, полученных от практически здоровых женщин, представлены на рисунке 1.

Из 54 пациенток с БВ у 18 заболевание протекало бессимптомно, а 36 женщин предъявляли жалобы на беловато-серые выделения из влагалища с неприятным запахом при отсутствии признаков воспаления.

При микроскопии преимущественно выявлялись так называемые «ключевые клетки» в сочетании с лейкоцитами до 10 в поле зрения. Mорфотипы Gardnerella spp. были обнаружены в большом количестве в 36 образцах, изолированно – в 10, не выявлялись в 8 случаях. Лактоморфотипы либо отсутствовали вовсе, либо наблюдались единично в одном поле зрения. Клетки дрожжеподобных грибов (мицелии отсутствовали) были обнаружены в 9 исследуемых материалах.

Уровень pH вагинального отделяемого составил 4,5–6,0. Аминный тест оказался отрицательным у 8 пациенток и положительным – у 46. По критериям Нюджента, 3 материала были оценены на 0–3 балла, 17 – на 4–6 баллов, 34 – на 7–10 баллов (рис. 2).

Из пациентов с БВ у 8 не было симптомов. Из результатов аминового теста у 8 женщин с БВ был отрицательный. Из материалов исследования, в которых был обнаружен морфотип Gardnerella spp., этот морфотип был выявлен единично в поле зрения микроскопа у 14, из которых 4 были взяты у практически здоровых женщин, 10 – у БВ. Из материала исследования, который был оценен по критериям Нюджента как 0–3, 3 были от пациенток с БВ и 19 – из контрольной группы. Материалы обследования оценены на 4–6 баллов, из них 7 от контрольной группы, 17 – от пациенток с БВ, на 7–10 баллов – от 34 пациенток с БВ.

 

Таблица 1. Микробиота влагалища здоровых женщин, пациенток с бактериальным вагинозом и неспецифическим вагинитом

Примечание: точность различий между группами рассчитывалась с использованием критерия Пирсона. *– значения p<0,001 соответствуют высокой степени значимости результатов.

 

Сравнивали диагностические результаты оценки материалов, взятых из влагалища практически здоровых женщин, женщин с БВ по критериям Амселя и Нюджента.

Представленные данные демонстрируют сравнительную диагностическую эффективность критериев Амселя и критериев Нюджента при бактериальном вагинозе. Расчет выполнен по стандартным формулам оценки чувствительности (Se), специфичности (Sp), положительной и отрицательной прогностической ценности (PPV, NPV) и др. Как видно из таблицы, критерии Амселя характеризуются значительно более высокой специфичностью (Sp=96,2%), чувствительностью (Se=70,4%), положительной прогностической ценностью (pPV=97,4%) и негативной прогностической ценностью (nPV=61,0) по сравнению с критериями Нюджента (Sp=73,1%, Se=63,0%, pPV=82,9% и nPV=48,7) соответственно. Это свидетельствует о большей надежности метода Амселя при подтверждении диагноза. Однако чувствительность обоих методов остается умеренной, что указывает на необходимость дополнительного лабораторного подтверждения отрицательных результатов. Таким образом, критерии Амселя могут рассматриваться как предпочтительный инструмент клинической диагностики, тогда как критерии Нюджента целесообразно использовать в качестве лабораторного метода

По совокупности результатов обоих критериев точный диагноз установить не удалось у 32 больных.

Помимо микроскопического анализа было проведено культуральное исследование, в ходе которого микроорганизмы были идентифицированы и количественно определены (табл. 1). Из исследованных материалов посевов выделяли чистые культуры, а идентификацию обнаруженных микроорганизмов проводили общепринятыми в микробиологии методами, руководствуясь номенклатурой Бердже и стандартами EUCAST.

Согласно результатам микологического исследования, Candida spp. была обнаружена в концентрации до 10³ КОЕ/мл. Однако, с учетом клинических данных, отсутствия мицелиальных форм грибов при микроскопии патологического материала, а также их слабой культивируемости, диагноз кандидозного вагинита был исключен.

Дополнительно был проведен анализ RT q PCR на образцах вагинальных выделений от 30 пациенток с сомнительными результатами, полученными на основе микроскопических и культуральных методов (рис. 3).

Согласно результатам панели тестов на бактериальный вагиноз Allplex™ BacterialVaginosis, Gardnerellavaginalis была выявлена в 3 из 27 исследованных образцов в низкой концентрации (≤10⁴ ДНК/мл), а в 24 образцах – в высокой концентрации (≥10^6-9 ДНК/мл). Другие этиологические агенты, входящие в состав панели, были обнаружены в диапазоне концентраций от 10⁸ до 10¹¹ ДНК/мл. Таким образом, из 30 исследованных образцов диагноз БВ был подтвержден в 25 случаях и опровергнут в 5 (c²=44,51; df=6; p<0,001).

На следующем этапе исследования определяли уровни витамина D в сыворотке крови путем измерения концентраций 25-ОН витамина D₂ и 25-ОН витамина D_3.

В ходе обследования у 52 женщин была выявлена нормальная концентрация витамина D, а у 28 – отмечалась недостаточность. Далее была проведена оценка уровня витамина D в зависимости от диагностированной патологии (табл. 2).

 

Таблица 2. Концентрация витамина D в сыворотке крови

Примечание: * – достоверность различий с группой здоровых лиц, p<0,05.

 

 

Таблица 3. Влияние уровня витамина D на результаты тестовой панели Allplex^TMRTqPCR

Примечание: p<0,05 (c²=16,63, p=0,0199) статистически значимо.

 

В соответствии с целью исследования была изучена взаимосвязь между результатами панели тестов на бактериальный вагиноз AllplexTM RT q PCR и концентрацией витамина D в сыворотке крови.

Из 25 пациенток с бактериальным вагинозом, которые прошли RT q PCR, у 9 наблюдалась нормальная концентрация витамина D (≥30 нг/мл), а у 16 – недостаточность (≤30 нг/мл ) этого витамина. Результаты представлены в таблице 3.

Из 25 образцов с подтвержденным диагнозом БВ в 7 случаях этиологическими агентами были моноинфекции, а в 18 случаях наблюдались ассоциации двух или трех микроорганизмов. Из пациентов с нормальной концентрацией витамина D в сыворотке крови G. vaginalis был обнаружен у 6 пациентов, моноинфекция B. fragilis – у 1 пациента, а другие патогены были обнаружены в ассоциации с G. vaginalis у 18 пациентов. Ассоциации были чаще у пациентов с недостаточностью витамина D (<30 нг/мл).

Обсуждение

Хотя микроскопические методы широко применяются в диагностике, в некоторых случаях возможны ложноположительные результаты из-за способности других бактерий прикрепляться к эпителиальным клеткам. Ложноотрицательные результаты могут быть обусловлены ингибированием адгезии IgA к эпителиальным клеткам. В ситуациях, когда доминируют Gardnerella vaginalis и Mobiluncus spp., аминный тест может давать отрицательный (-) результат [1, 5, 8, 9, 19, 20]. В таких случаях эффективность критериев Амселя и Нюджента для диагностики снижается.

В нашем исследовании из 32 случаев предполагаемых диагнозов, установленных микроскопическим методом, только 2 были подтверждены культуральным методом, в то время как в 30 случаях диагноз был верифицирован с помощью молекулярно-генетического метода – панели Allplex™ Bacterial Vaginosis Test, что позволило определить этиологические агенты.

При изучении роли дефицита витамина D в этиопатогенезе БВ нами отмечена более высокая частота микробных ассоциаций у пациентов с дефицитом витамина D. Так, из 25 пациентов с БВ, подтвержденным в ходе молекулярно-генетического исследования, у 18 (72%) выявлена ассоциативная инфекция, из них у 16 (88,9%) – c дефицитом витамина D. Для уточнения роли дефицита витамина D в этиопатогенезе этих заболеваний необходимо проведение комплексных исследований.

Выводы:

1. Выявлены случаи, когда результаты диагностики БВ по критериям Амселя и Нюджента не совпадают. Критерии Амселя являются более подходящими для диагностики бактериального вагиноза в клинической практике. Критерии Нюджента отражают лабораторный подход, но уступают критериям Амселя по чувствительности и специ-фичности.

2. Несмотря на значимость каждого диагностического метода, при заболеваниях влагалища, сопровождающихся нарушением микробиоценоза, таких как БВ, только качественное и количественное определение доминирующих микроорганизмов обеспечивает более точную постановку диагноза.

3. Наиболее эффективным методом диагностики БВ является качественная и количественная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (RT q PCR).

4. На следующем этапе необходимо проведение разносторонних исследований для уточнения роли недостаточности витамина D в этиопатогенезе данных заболеваний.

 

ЛИТЕРАТУРА

 

1. Анкирская А.С., Муравьева В.В. // Акушерство и гинекология: Новости. Мнения. Обучения. – 2020. – Т.8, №1. – С.69–76.

2. Yasodhara P., Raghunath M., Sreeramulu D., et al. // J Reprod Immunol. – 2006. – Vol.70, N1–2. – P.133–141.

3. Пустотина О.А. // Акушерство и гинекология. – 2018. – №3. – С.113–118.

4. Donders G.G.G., Bellen G., Grinceviciene S., et al. // Res Microbiol. – 2017. – Vol.168, N9–10. – P.845–858.

5. Redelinghuys M.J., Geldenhuys J., Jung H., Kock M.M. // Front Cell Infect Microbiol. – 2020. – Vol.10, N354. – P.1–20.

6. Kaambo E., Africa C.W.J. // Afr J Reprod Health. – 2017. – Vol.21, N2. – P.108–118.

7. Савичева А.М., Шипицына Е.В. // Гинекология. – 2012. – №14(3). – С.38–43.

8. Verstraelen H., Swidsinski A. // Curr Opin Infect Dis. – 2013. – N26. – P.86.

9. Шалепо К.В., Назарова В.В., Менухова Ю.Н., Румянцева Т.А., Гущин А.Е., Савичева А.М. // Журнал акушерства и женских болезней. – 2014. – Т.63, №1. – С.26–32.

10. Lamont R.F., Sobel J.D., Akins R.A., et al. // BJOG. – 2011. – Vol.118, N5. – P.533–549.

11. Ali S.B., Perdawood D., Abdulrahman R., et.al. // Saudi J Biol Sci. – 2020. – Vol.27, N11. – P.2942–2947.

12. Tartagni M., Cicinelli M.V., Tartagni M.V. // J Pediatr Adolesc Gynecol. – 2016. – Vol.29, N4. – P.357–361.

13. Купина А.Д., Петров Ю.А. // Вопросы питания. – 2021. – №1 (533). – С.6–14.

14. Мальцева Л.И., Васильева Э.Н. // Практическая медицина. – 2013. – №7. – С.42–47.

15. White J.H. // Rev Endocr Metab Disord. – 2012. – Vol.13. – P.21–29.

16. Yang C.Y., Leung P.S., Adamopoulos I.E., Gershwin M.E. // Clin Rev Allergy Immunol. – 2013. – Vol.45, N2. – P.217–226.

17. Karin, Breding, Vikström, et al. // J Womens Health Gyn. – 2020. – Vol.7. – P.1–7.

18. Numanovic N., Ribis S., Cukic J., et al. // J Infect Dev Ctries. – 2021. – Vol.15, N9. ≠ P.1293–1298.

19. Исенова С.Ш., Датхаева З.А., Пак Н.Ю. и др. // Вестник КазНМУ. – 2014. – №4. – C.14–21.

20. Trama J.P., Pascal K.E., Zimmerman J., et al. // Mol Cell Probes. – 2008. – N22. – P.96–102.

 

Медицинские новости. – 2026. – №6. – С. 81-85.

Внимание! Статья адресована врачам-специалистам. Перепечатка данной статьи или её фрагментов в Интернете без гиперссылки на первоисточник рассматривается как нарушение авторских прав.