• Поиск:

издатель: ЮпокомИнфоМед

Шахмамедова С.О.

Функциональная активность нейтрофилов крови при ишемически-реперфузионном поражении печени

Азербайджанский медицинский университет, Баку

Внимание! Статья адресована врачам-специалистам

 

Shakhmamedova S.O.

Azerbaijan Medical University, Baku

Functional activity of blood neutrophils in ischemia-reperfusion liver injury

Резюме. Рассматриваются внутриклеточные метаболические изменения нейтрофилов при ишемически-реперфузионном поражении печени. Объектом исследования послужили 50 белых крыс обоего пола. Все процедуры с животными выполнялись в соответствии с международными правилами и нормами (86/09 ЕЕС и LINESCO (Париж)), принятыми Европейским обществом биоэтики. Изменения митохондриальной (НАДФ-0) и лизосомальной (КФ) ферментативной активности нейтрофилов имели разнонаправленный и фазовый характер в зависимости от сроков ишемии и времени после реперфузии. Относительно высокие значения гликогена, на фоне которого происходили эти изменения, указывают на внутриклеточную активацию процессов гликонеогенеза.

Ключевые слова: ишемия-реперфузия, печень, никотинамидадениндинуклеотидфосфат оксидаза (НАДФ-0) и кислая фосфатаза, гликоген.

Медицинские новости. – 2020. – №2. – С. 80–82.

Summary. The aim of this study was to investigate the metabolic alterations in neutrophils in ischemia-reperfusion liver injury. The study was carried out on 50 white rats of both sexes. All procedures with animals were performed in accordance with international rules and regulations (86/09 EEC and LINESCO (Paris)), adopted by the European Society of Bioethics. Changes in mitochondrial and lysocomal enzymatic activity of neutrophils were interrelated and the nature of the phase depended on the duration of ischemia and the duration of reperfusion. Relatively high values of glycogen under which these changes occurred indicate intracellular activation of gluconeogenesis.

Keywords: ischemia-reperfusion injury, liver, nicotinamidadenindinucleotidfosfat ocsidase, acidic phosphatase, glycogen.

Meditsinskie novosti. – 2020. – N2. – P. 80–82.

Ишемически-реперфузионное поражение печени рассматривается как сложный комплекс адаптивных и патологических реакций организма, включающих каскад метаболических, иммунологических и морфологических изменений, результатом которых может быть как восстановление функции органа, так и ее поражения разной степени тяжести, вплоть до гибели органа [1, 2].

Ключевыми патофизиологическими механизмами в реализации синдрома ишемии-реперфузии печени являются нарушения микроциркуляции и транспорта кислорода, воспаление, некроз и апоптоз, что в конечном итоге завершается нарушением множества функций печени и развитием печеночной недостаточности [3, 4]. Важным фактором, способствующим развитию реперфузионных повреждений, считается окислительный стресс [5]. Дисбаланс между потребностью ткани в кислороде и его доставкой создает условия для усиленного образования свободных радикалов и активации процессов перекисного окисления липидов, ведущих в конечном счете к снижению внутриклеточного метаболизма, повреждению клеточных и субклеточных мембранных структур гепатоцитов [6, 7]. Установлено, что клетки периферической крови как элементы внутренней среды организма принимают участие во всех физиологических и патологических процессах [8, 9]. Поэтому особый интерес представляет изучение активности митохондриальных и лизосомальных ферментов и уровня гликогена в нейтрофилах периферической крови при ишемически-реперфузионных поражениях печени.

Цель исследования – изучение внутриклеточных метаболических изменений нейтрофилов при ишемически-реперфузионном поражении печени.

Материалы и методы

Объектом исследования послужили 50 белых крыс обоего пола. Все процедуры с животными выполняли в соответствии с международными правилами и нормами (86/09 ЕЕС и LINESCO (Париж)), принятым Европейским обществом биоэтики. Под ингаляционным эфирным наркозом при условиях общего обезболивания производился срединный разрез брюшной полости. Накладывалась лигатура на первую ветвь артерии, входящей в печень. Ишемия печени создавалась путем пережатия сосуда в течение 5, 10 и 15 минут. Реперфузия создавалась путем расслабления лигатуры через 5, 10 и 15 минут. В соответствии с целью настоящего исследования подопытные животные были подразделены на основную группу с ишемически-реперфузионным синдромом печени (I, II, III) и контрольную, состоящую из интактных животных. В I основную группу включено 15 животных после 5-минутной, во II – 15 животных после 10-минутной, а в III – 15 животных после 15-минутной ишемии-реперфузии. Каждая группа в зависимости от времени взятия образцов крови (через 5, 10, 15 дней) подразделена на подгруппы А, В, С.

У всех подопытных крыс цитохимическим методом [10] в нейтрофилах периферической крови определяли уровень гликогена (Гл), активность никотинамидадениндинуклеотид фосфат оксидазы (НАДФ-0) и кислой фосфатазы (КФ). Активность НАДФ-0 выражали средним числом гранул формазана в одном нейтрофиле (гр/н) при расчете на 50 клеток, а для КФ и Гл использовали средний цитохимический показатель (СЦП).

При статистической обработке наряду со средним цитохимическим показателем (Q±m) высчитывали коэффициент вариации (V), асимметрии (А) и эксцесса для определения степени распределения НАДФ-0, КФ и Гл.

Результаты и обсуждение

Изменения цитохимической активности нейтрофилов при ишемически-реперфузионном поражении печени отражены в таблице.

 

Таблица. Цитохимические показатели нейтрофилов белых крыс при ишемически-реперфузионном поражении печени (M±m)

Группа

НАДФ-0, гр/н

КФ, сцп

Гл, сцп

Q±m

V

A

E

Q±m

V

A

E

Q±m

V

A

E

 

I, n=15

A1, n=5

10,2±0,51хх

42,2

0,98

0,79

0,28±0,02

43,5

0,92

0,66

0,71±0,04

44,8

0,86

0,74

B1, n=5

7,40±0,42х

43,8

1,04

0,75

0,21±0,03х

46,2

1,10

0,72

0,86±0,05

46,8

0,94

0,76

C1, n=5

7,02±0,55

46,0

1,09

0,72

0,19±0,02

48,4

1,16

0,79

0,80±0,06

51,0

1,10

0,78

II, n=15

A1, n=5

3,20±0,96

43,5

1,08

0,70

0,20±0,02х

49,2

1,08

0,72

0,88±0,05

52,6

0,88

0,75

B1, n=5

4,10±0,42

46,8

1,16

-0,36

0,18±0,02х

49,6

1,14

-0,12

0,95±0,06х

58,2

1,06

-0,16

C1, n=5

4,50±0,51

48,5

1,20

-0,34

0,17±0,02хх

51,8

1,20

-0,34

1,08±0,06хх

60,4

1,12

-0,22

III, n=15

A1, n=5

2,61±0,15хх

45,4

1,14

-0,25

0,17±0,02хх

52,0

1,19

0,75

0,92±0,08х

60,8

1,14

0,85

B1, n=5

2,72±0,16х

48,6

1,21

-0,36

0,12±0,01хх

54,6

1,25

-0,27

1,14±0,05х

61,2

1,21

-0,19

C1, n=5

2,85±0,15

52,0

1,29

-0,45

0,09±0,01хх

58,8

1,36

-0,34

1,25±0,06хх

62,4

1,28

-0,26

Контроль, n=5

5,25±0,25

32,0

0,54

0,50

0,34±0,03

38,0

0,62

0,55

0,68±0,04

36,6

0,64

0,60

Примечание. Статистическая значимость показателя в сравнении с таковым в контрольной группе: х – p<0,05; хх – p<0,01.

 

При сравнении с данными контрольной группы изменения, происходящие в цитохимическом статусе нейтрофилов основных групп (I, II, III) носят разнонаправленный характер. В нейтрофилах I группы подопытных животных выявлено достоверное увеличение активности НАДФ-0 (p?0,01), умеренное повышение содержания Гл (p>0,05) и статистически значимое снижение КФ (p?0,01). Эти изменения в зависимости от длительности ишемии носили фазовый характер. Так, в I группе после кратковременной ишемии (5 минут) активность НАДФ-0 повысилась дважды по сравнению с контролем, а во II и III группах после 10–15-минутной ишемии отмечалась выраженная депрессия вышеуказанного показателя (p?0,01).

Изменение активности КФ имело однонаправленный характер, степень снижения энзиматической активности определялась временем ишемии. Эти изменения в IA подгруппе в динамике еще более усугублялись. Во всех подгруппах (А, В, С) II и III групп отмечалось статистически значимое снижение активности КФ. Выраженная депрессия ферментативной активности установлена в С подгруппе III группы, где значения КФ уступали данным контрольной группы.

Изменения в отношении содержания Гл в нейтрофилах при ишемически-реперфузионном поражении печени имели одинаковый характер во всех трех группах. Статистически значимое повышение содержания этого вещества установлено в С подгруппе II группы (p?0,01), а также В и С подгруппах III группы.

Для более совершенного анализа метаболических процессов, происходящих в нейтрофильных гранулоцитах при ишемии-реперфузии в экспериментально-цитохимическом материале, изучена структура популяционных показателей (V, A, E). Установлено, что в отличие от среднетипичной активности (Q) нейтрофилов, структурные показатели популяции более точно отражают внутриклеточный метаболизм.

Так, при отсутствии выраженных изменений среднетипичной активности НАДФ-0 (7,02±0,55) в С подгруппе при кратковременной ишемии в структурных показателях популяции (V, A, E) выявлены выраженные изменения. Они указывают на высокую вариабельность энзиматической активности, на преобладание в популяции клеток с низкой, единичных клеток с высокой и дефицит клеток с типичной активностью фермента. С учетом того, что НАДФ-0 является маркером митохондрий, полученные результаты могут свидетельствовать об уменьшении количества или же повреждении данных органелл клетки, что ведет к снижению процессов энергетического метаболизма и компрометации резистентности организма.

При индивидуальном анализе выявлено, что через 5 дней после ишемии-реперфузии у одной, через 10 дней – у двух, через 15 дней – у трех крыс происходят восстановительные процессы в популяционном ядре. При этом необходимо отметить, что последнее сопровождается сменой отрицательных значений Е НАДФ-0 на положительные, а также снижается А.

При сравнительном анализе цитохимических данных крыс основной группы наибольшей информативностью обладала НАДФ-0. Необходимо отметить, что НАДФ-0, являясь кардинальным цитохимическим показателем нейтрофилов периферической крови и критерием основного энергетического обмена митохондрий, отражает состояние организма в целом.

Таким образом, цитохимические показатели функциональной активности нейтрофилов являются информативными маркерами, отражающими состояние метаболических процессов в организме при ишемически-реперфузионном поражении печени. Изменения митохондриальной (НАДФ-0) и лизосомальной (КФ) энзиматической активности нейтрофилов имели разнонаправленный и фазовый характер в зависимости от сроков ишемии и времени после реперфузии. Относительно высокие значения гликогена, на фоне которого происходили эти изменения, указывают на внутриклеточную активацию процессов гликонеогенеза.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Abu-Amara M. // Live Transport. – 2010. – Vol.16, N9. – Р.1016–1032.

2. Li J. // Eur. Rev. Med. Pharmacol Sci. – 2015. – Vol.19, N11. – Р.2036–2047.

3. Khodosovskii M.N. // Zhurnal GrGMU. – 2016. – Vol.4. – Р.20–25.

4. Jaeschke H., Woolbright B.L. // Transplant. Rev. – 2012. – Vol.26, N2. – P.103–114.

5. Donadon M., Molinari A.F., Corarri F., et al. // World Journal of Surgery. – 2016. – Vol.40, N9. – Р.2202–2212.

6. Suyavazan A. // Hepatol Res. – 2017. – Vol.47, N1. – P.31–48.

7. Guan L.-Y., Fu P.-Y., Li P-D., et al. // World Journal of Gastrointestinal Surgery. – 2014. – Vol.6, N7. – Р.122–128.

8. Borreqaard N. // Immunity. – 2010. – Vol.33, N5. – Р.657–670.

9. Combart A.F. // Blood. – 2015. – Vol.125, N11. – Р.1688–1690.

10. Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. – М., 1983. – 320 с.

 

Медицинские новости. – 2020. – №2. – С. 80-82.

Внимание! Статья адресована врачам-специалистам. Перепечатка данной статьи или её фрагментов в Интернете без гиперссылки на первоисточник рассматривается как нарушение авторских прав.

Содержание » Архив »

Разработка сайта: Softconveyer