Внимание! Статья адресована врачам-специалистам

Saidjalilova D.D., Mirzaeva D.B.

Tashkent Medical Academy, Uzbekistan

Study of the role of genetic research of the hemostatic system

in the efficiency of in vitro fertilization

Резюме. Обследованы 143 беременных после ЭКО с проведением молекулярно-генетического исследования. Изучен анализ ассоциаций полиморфизма тромбофилических генов (C677T гена MTHFR, фактора V (Leiden) и протромбина). Выявлены взаимосвязь наличия невынашивания беременности при ЭКО с генетическими нарушениями системы гемостаза. Тромбофилические мутации в группе пациенток с ЭКО, беременность которых закончилась невынашиванием, обнаружены у 61,6%, а среди женщин с успешным исходом ЭКО – у 31,6%. При наблюдении сочетанных генетических мутаций риск возникновения невынашивания у пациенток с ЭКО увеличивался более чем в 6 раз. В результате исследования у 4,7% пациенток были выявлены генетические комбинации FV G1691A+MTHFR С677 Т, у 1,16% – FII+MTHFR. Комплексное динамическое наблюдение и патогенетическая профилактика с целью нормализации гемостазиологических показателей у беременных с ЭКО на фоне тромбофилии позволит снизить частоту невынашивания беременности.

Ключевые слова: экстракорпоральное оплодотворение, тромбофилия, полиморфизм генов, невынашивание.

Медицинские новости. – 2019. – №7. – С. 60–62.

Summary. 143 pregnant women after IVF were examined with molecular genetic testing. The analysis of associations of polymorphism of thrombophilic genes (C677T of the MTHFR gene, factor V (Leiden) and prothrombin) was studied. The interrelation of the presence of miscarriage of pregnancy with IVF with genetic disorders of the hemostasis system was revealed. Thrombophilic mutations in the group of patients with IVF whose pregnancy ended in miscarriage were found in 61.6%, and among women with a successful IVF outcome – in 31.6%. When observing combined genetic mutations, the risk of miscarriage in patients with IVF increased more than 6 times higher. As a result of the study, genetic combinations of FV G1691A+MTHFR C677T were detected in 4.7% of patients, and FII+MTHFR in 1.16%. Comprehensive dynamic monitoring and pathogenetic prophylaxis with the aim of normalizing hemostasiological parameters in pregnant women with IVF on the background of thrombophilia will reduce the incidence of miscarriage.

Keywords: in vitro fertilization, thrombophilia, gene polymorphism, miscarriage.

Meditsinskie novosti. – 2019. – N7. – P. 60–62.

Во время беременности генетические формы тромбофилии клинически проявляются в виде тромбозов и акушерских осложнений, что связано с особенностями системы гемостаза при физиологически протекающей беременности [3, 6]. В основе причин развития патологических состояний в акушерстве, таких как плацентарная дисфункция, преждевременная отслойка плаценты, преэклампсия, лежит общий генез – нарушения в системе гемостаза. В настоящее время известен целый ряд генетических мутаций и полиморфизмов генов тромбофилической направленности, ответственных за отслойку плаценты, преэклампсию и кровотечение при родах [1, 7, 10]. Генетическая форма тромбофилии среди причин акушерских осложнений составляет от 10 до 30%. Сочетание нескольких мутаций ассоциируется с увеличением риска тромбообразования, следовательно, и развитием осложнений беременности [5, 8, 11].

Своевременная диагностика наследственных и приобретенных форм тромбофилий во время беременности при ЭКО позволит провести соответствующие профилактические мероприятия, которые помогут предотвратить в некоторой степени развитие осложнений, в том числе невынашивания [2, 9]. Последнее диктует необходимость дифференцированного подхода к тромбопрофилактике в различных клинических ситуациях.

Не вызывает сомнения тот факт, что на разных территориях и популяциях вклад полиморфизма генов разнообразен. Ряд исследователей не считают целесообразным проведение скрининга по наследственным дефектам гемостаза, другие считают определение этих генетических маркеров важным тест-скринингом для беременных и планирующих беременность женщин при проведении метода ЭКО [4, 10].

Учитывая наиболее высокую частоту этих мутаций среди причин акушерских осложнений, в том числе после ЭКО, возникает необходимость их выявления в группах риска, что позволит установить причину и патогенетически правильно проводить профилактику данной патологии. Наличие значительных межэтнических и межрасовых различий вышеуказанных мутаций вызывает огромный интерес и диктует необходимость изучения их распространенности и оценки генетического вклада в развитие невынашивания после ЭКО в Узбекистане.

Цель исследования – определить роль полиморфизма генов свертывающей системы крови в механизме развития невынашивания беременности при ЭКО.

Материалы и методы

Проведен анализ ДНК у 86 женщин с ЭКО, беременность которых осложнилась невынашиванием (основная группа) и 57 женщин с успешным исходом ЭКО (группа сравнения). Предварительно для определения носительства мутаций C677T гена MTHFR, фактора V (Leiden) и протромбина проведено молекулярно-генетическое исследование образцов ДНК. Возраст обследованных женщин – от 27 до 38 лет. Образцы ДНК выделяли в соответствии с методикой, предложенной J. Sambrook (1989), с некоторыми модификациями. Полимеразную цепную реакцию полиморфного локуса проводили на программируемом термоциклере Applied Biosystems (США).

Результаты и обсуждение

У женщин с ЭКО при наличии генетических форм тромбофилии состояние гемостаза во время беременности имело ряд особенностей, характеризующихся активацией коагуляционного потенциала. Выявленные закономерности факторов риска с учетом генетических нарушений в системе гемостаза, характеризующих процессы деструкции в плаценте, лежат в основе схемы патогенеза такого частого акушерского осложнения при ЭКО, как невынашивание, позволяющей оценить степень нарушений в системе «мать – плацента – плод».

Наши исследования показали, что тромбофилические мутации в основной группе пациенток с ЭКО обнаружены у 61,6% (53 женщины), а среди пациенток с физиологическим течением беременности при ЭКО – у 31,6%. Исследование структуры маркеров тромбофилии показало, что наиболее распространенной ее формой у женщин с невынашиванием при ЭКО оказался полиморфизм C677T гена MTHFR, который диагностирован у 45 (84,9%) пациенток, из них у 6 (13,3%) – гомозиготная и у 39 (86,7%) – гетерозиготная форма. Мутация фактора V Leiden обнаружена у 6 (11,3%) женщин с ЭКО, и все они оказались носителями гетерозиготного генотипа. Редкая для азиатской популяции мутация G20210A гена протромбина определена всего у 2 (3,8%) женщин с ЭКО, все они также имели гетерозиготный генотип.

Результаты нашей работы частично совпадают с данными некоторых авторов [8, 11], согласно которым наиболее распространенные в европейской популяции тромбофилические факторы – полиморфизм гена 5,10-метилентетрагидрофолатредуктазы С677Т, лейденская мутация фактора V G1691A, мутация гена протромбина G20210A с почти такой же частотой встречаются среди обследованных женщин с ЭКО.

Таким образом, высокая частота наследственной тромбофилии у обследованных женщин с ЭКО позволила нам рассматривать ее в качестве важнейшего этиопатогенетического фактора развития невынашивания, что диктует необходимость выбора оптимальной и безопасной профилактической терапии, направленной на компенсацию генетических нарушений.

В результате исследования генных взаимодействий аллельных вариантов FII, FV и MTHFR были выявлены неслучайные ассоциации функционально неблагоприятных генотипов и аллелей с развитием невынашивания у женщин с ЭКО и их клиническими формами (таблица).

Таблица. Частота встречаемости сложных генетических комбинаций

у женщин с невынашиванием при ЭКО и в группе с благоприятным исходом ЭКО

Примечание:*χ²=5,8; Р=0,008; OR=5,0; 95% CI (FV+MTHFR).

Из 5 выявленных сочетанных генотипов 4 были носительницами сочетанного генотипа FV G1691A+MTHFR С677Т. Только у одной пациентки основной группы выявлено сочетание редких гетерозиготных генотипов FII+MTHFR. Суммарная доля одновременного носительства аллелей FV G1691A+MTHFR С677Т в группе больных с невынашиванием при ЭКО составила 4,7%, тогда как в группе с благоприятным исходом такая комбинация не наблюдалось ни у одной из обследованных женщин. При этом нужно отметить, что у всех пациенток с гетерозиготным носительством мутантного аллеля гена FVG1691A одновременно были обнаружены только гетерозиготные аллели гена MTHFR С677Т (двойные гетерозиготы). У женщин группы сравнения другие варианты сочетанного носительства исследованных нами генов не выявлены. Статистический анализ данных генных взаимодействий показал, что при носительстве неблагоприятных генотипов FVG1691A+MTHFR С677Т риск возникновения невынашивания у пациенток с ЭКО более чем в 6 раз выше, чем у не носителей данной комбинации (?^{2=5,95; Р=0,007; OR=6,12), что подтверждает значение как отдельных аллелей генов, так и их сочетаний в развитии осложнений беременности.}

Таким образом, полученные результаты могут свидетельствовать о высокой роли одновременного носительства аллелей наследственной тромбофилии FVG1691A+MTHFR С677Т как одного из ключевых факторов риска развития тромбофилических осложнений у женщин с ЭКО. Полученные нами результаты раскрывают некоторые генетические аспекты возникновения невынашивания у женщин и свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма других генов, вовлеченных в патогенез осложнений беременности. Своевременное выявление данных мутаций и проведение профилактических стандартных методов терапии позволяет улучшить исходы беременности и снизить перинатальную заболеваемость и смертность, а также является профилактикой материнской заболеваемости и смертности.

Заключение

Результаты статистической оценки риска возникновения невынашивания у женщин при ЭКО с генетической формой тромбофилии показали, что при одновременном носительстве в генотипе пациентов комбинации тромбофилических маркеров FVG1691A+MTHFR С677Т достоверно увеличивается риска развития данного осложнения в 9,5 раза. Комплексное динамическое наблюдение и патогенетическая профилактика благодаря нормализации гемостазиологических показателей у беременных группы риска развития невынашивания на фоне тромбофилии будет способствовать снижению частоты осложнений беременности и родов, частоты невынашивания и перинатальных потерь плода. При этом, чем больше отягощающих беременность факторов, тем выше отношения шансов и больше вероятность развития неудачного исхода ЭКО. Таким образом, при подготовке к планируемой беременности пациенток с неудачными попытками ЭКО необходимо учитывать возможные нарушения в системе гемостаза (скрытые формы генетических тромбофилий) и их роль в этиопатогенезе неудач ЭКО.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Вспомогательные репродуктивные технологии. Проблемы потерь беременности // Лечащий врач. – 2010. – №3. – С.46–48.

2. Долгов В.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза / В.В. Долгов, П.В. Свирин. – М., 2005. – 227 с.

3. Лопатина Т.В., Кохно Н.И. // Репродуктивное здоровье детей и подростков. – 2006. – №6. – С.12–15.

4. Селхаджиева М.С. // Акушерство, гинекология и репродукция. – 2014. – №1. – С.31–33.

5. Хизроева Д.Х., Машкова Т.М. // Акушерство, гинекология и репродукция. – 2014. – №1. –С.26–30.

6. Bennett S.A., Bagot C.N., Arya R. // Br. J. Haematol. – 2012. – Vol.157, N5. – P.529–542.

7. Chighizola C.B., de Jesus G.R. // Lupus. – 2014. – Vol.23, N12. – P.1232–1238.

8. Di Nisio M., Rutjes A.W., Ferrante N., Tiboni G.M., Cuccurullo F., Porreca E. // Blood. – 2011. – Vol.118, N10. – P.2670–2678.

9. Kovac M., Mitic G., et al. // Gynecol. Obstet. Invest. – 2010. – Vol.69, N4. – P.233–238.

10. Mazhar S.B., Emanuel A. // Haematology Updates. – 2011. – P.56–60.

11. Paulmyer-Lacroix O., Despierres L., Courbiere B., Bardin N. // BioMed Res Int. – 2014: 314704.

Медицинские новости. – 2019. – №7. – С. 60-62.

Внимание! Статья адресована врачам-специалистам. Перепечатка данной статьи или её фрагментов в Интернете без гиперссылки на первоисточник рассматривается как нарушение авторских прав.